概念和原理

RNA-seq即转录组测序技术，就是把mRNA、smallRNA和non-coding RNA或者其中一些用高适量测序技术把它们的序列测出来，反映出它们的表达水平。首先，我们获得细胞总RNA，然后根据实验需要，比如是需要测mRNA、non-coding RNA还是sma¨RNA等，对RNA样品进行处理。处理好的RNA冉进行片段化，然后反转录形成cDHiA，获得cDNA文库，然后在cDNA片段的两端接上接头，最后用新一代高适量测序仪进行测序。

科研和临床应用

l 丰富基因注释的很多方面内容，包括5’／3‘边界鉴定、UTRs区域鉴定以及新的转录区域鉴定等。RNA-Seq还可对可变剪接进行定量研究。

l 发现新基因，无需背景信息。

l 转录本变异研究，如融合基因鉴定、编码序列多态性研究等。

l 非编码区域功能研究，如发现和分析non-coding RlxIA在表观遗传、转录及转录后等多个层面调控基因表达。

l 基因表达水平研究，准确地确定细胞中RNA的表达水平。

标本采集、保存、运输

l 对于RNA样品，如需长途运输，可往检测合格的RlxIA溶液加入1/10体积的3MNaAe pH5.2,混匀后再加2倍体积无水乙醇，混匀，编号密葑（注意切匆乙醇泄漏），冷冻运输。

l 对于组织样品，采样后立即用液氮速冻，保存于-80℃，冷冻运输；提取RNA后经变性电泳，保证各RNA条带清晰、比例适中、完整性好、无降解。

l 对于细胞样品，先使用TRIzol试剂进行处理（可参考TRIzol试剂说明书），每份样品≥5X1 06个细胞，于-800c保存，需提供1-2份备份样品。原则上不接收未经TRIzol处理的细胞样品。

l 样品保存期间切忌反复冻融。

客户须知

细胞（需提供1-2份备份样品，每份样品≥5X106个细胞）、组织(≥2g)、RNA（浓度≥250 ngml，总量≥50 Ug, OD260/280介于1.8-2.2之间，OD260/230值应≥2 0，28S/18S> 1.5; R|N值≥8.0,并确保RIxIA无降解，无污染；或提供浓度≥50 ng／乩总量≥1岫的mRNA。同时，。提供质量检测相关数据和图片）。

报告形式

l 原始数据报告（Fasta-Q格式）：包含所有测序序列的序列信息，碱基读取质量评估；

l 基本数据分析报告（Excel表格）：包含有效序列的序列信息，与参考基因组比对后的注释信息等；

l 高级数据分析（应客户要求定制）：如基因覆盖率和测序深度分析，基因表达差异分析，基因结构分析，鉴定选择性剪切现象，发现新县因，鉴定基因融台现象等。